BIS-TRIS-Puffer CAS 6976-37-0

Es handelt sich um einen effizienten biologischen Puffer mit einem effektiven pH-Pufferbereich von 5,8-7,2 und einem pKa-Wert von 6,5 (25 Grad). In biochemischen Experimenten reagieren viele Biomoleküle wie Proteine ​​und Nukleinsäuren sehr empfindlich auf pH-Werte, und selbst kleine pH-Änderungen können ihre Struktur und Funktion beeinflussen. BIS-TRIS kann den pH-Wert der Lösung innerhalb dieses pH-Bereichs stabilisieren und so eine stabile Umgebung für biochemische Reaktionen bieten. Im Prozess der Proteintrennung und -reinigung kann die natürliche Konformation des Proteins beibehalten werden, um eine Denaturierung oder Ausfällung aufgrund von pH-Änderungen zu verhindern.

Beispielsweise ist bei Proteinreinigungstechniken wie der Ionenaustauschchromatographie und der Affinitätschromatographie die Verwendung vonBIS-TRIS-Pufferkann sicherstellen, dass die Wechselwirkung zwischen Proteinen und Chromatographiemedien unter stabilen pH-Bedingungen stattfindet, wodurch die Reinigungseffizienz und Reinheit verbessert werden.

Bei Enzymaktivitätstests hängt die Enzymaktivität häufig von einer bestimmten pH-Umgebung ab. Der pH-Wert des Reaktionssystems kann präzise gesteuert werden, um es dem Enzym zu ermöglichen, unter optimalen pH-Bedingungen katalytische Aktivität auszuüben und so die Aktivität des Enzyms genau zu messen. Dies ist von großer Bedeutung für die Untersuchung der Eigenschaften, Wirkmechanismen und die Entwicklung von Enzympräparaten von Enzymen.

BIS-TRIS hat die Fähigkeit, mit verschiedenen Metallionen zu koordinieren und stabile Komplexe zu bilden, wie z. B. Zn² ⁺ - BIS-TRIS, Mn² ⁺ - BIS-TRIS usw. Diese Metallionenkomplexe spielen eine wichtige Rolle bei der Untersuchung der Struktur und Funktion von Biomolekülen. Bei der Strukturanalyse von Proteinen fungieren Metallionen häufig als beteiligte Cofaktoren bei der Bildung aktiver Zentren in Proteinen. Durch die Koordination von BIS-TRIS mit Metallionen kann die Struktur von Protein-Metallionenkomplexen stabilisiert werden, was den Einsatz von Techniken wie Röntgenkristallographie und Kernspinresonanz (NMR) für die Strukturanalyse erleichtert.

Beispielsweise benötigen die aktiven Zentren bestimmter zinkhaltiger Enzyme Zinkionen, um ihre katalytische Aktivität aufrechtzuerhalten, und BIS-TRIS Zn ² ⁺-Komplexe können eine stabile strukturelle Umgebung für diese Enzyme bereitstellen, was bei der genauen Analyse ihrer dreidimensionalen Strukturen hilft.

In der Nukleinsäureforschung wie der DNA-Sequenzierung können Metallionen auch an der Faltung und Funktionsregulation von Nukleinsäuren beteiligt sein. Die Koordination zwischen BIS-TRIS und Metallionen kann die lokale Umgebung von Nukleinsäuren regulieren und die Wechselwirkungen zwischen Nukleinsäuren und Proteinen, kleinen Molekülen usw. beeinflussen, was ein leistungsstarkes Werkzeug für die eingehende-Forschung der Struktur und Funktion von Nukleinsäuren darstellt.

BIS-TRIS hat wichtige Anwendungen in Proteinelektrophoreseexperimenten. SDS-PAGE (Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese) und Native PAGE (nicht denaturierende Polyacrylamid-Gelelektrophorese) sind gängige Proteinelektrophoresetechniken.BIS-TRIS-Pufferwird häufig zur Herstellung von Elektrophoresepuffer verwendet, um die pH-Stabilität der Lösung während der Elektrophorese aufrechtzuerhalten. Bei der SDS-PAGE werden Proteine ​​in einem Probenpuffer, der SDS und Mercaptoethanol enthält, denaturiert und negativ geladen und dann in einem Polyacrylamidgel nach Molekülgröße getrennt.

Es kann die Stabilität des pH-Werts des Elektrophoresepuffers gewährleisten, sodass Proteine ​​in einem elektrischen Feld wie erwartet wandern können, wodurch Proteine ​​mit unterschiedlichem Molekulargewicht genau getrennt und ihre relativen Molekulargewichte erfasst werden.

Bei der nativen PAGE behalten Proteine ​​ihre natürliche Konformation für die elektrophoretische Trennung bei. Seine Verwendung kann die Denaturierung von Proteinen aufgrund von pH-Änderungen verhindern, die natürliche Aktivität und Konformationsinformationen von Proteinen bewahren und dabei helfen, den natürlichen Zustand und die Wechselwirkungen von Proteinen zu untersuchen.

Western Blot ist eine wichtige experimentelle Technik zur Bestimmung des Expressionsniveaus von Zielproteinen. Bis-Tris-Propanpuffer wird häufig als Proteintransportpuffer in Immunblotting-Experimenten verwendet.

Während des Proteintransfers vom Gel zur Membran kann der Bis-Tris-Propanpuffer eine stabile pH-Umgebung aufrechterhalten und so sicherstellen, dass das Protein mit korrekter Konformation und korrektem Ladungszustand auf die Membran übertragen wird. Dies ist entscheidend für die anschließende Antikörperbindung und Signalerkennung.

Wenn Proteine ​​während des Transfervorgangs denaturiert werden oder sich ihre Konformation ändert, kann dies dazu führen, dass Antikörper das Zielprotein nicht genau erkennen können, wodurch die Genauigkeit der experimentellen Ergebnisse beeinträchtigt wird. Daher spielt der Bis-Tris-Propanpuffer eine entscheidende Rolle bei Immunblotting-Experimenten und trägt dazu bei, die Empfindlichkeit und Zuverlässigkeit der Experimente zu verbessern.

Die Zellkultur ist eine wichtige Technologie in der biomedizinischen Forschung und der pH-Wert des Zellkulturmediums hat einen erheblichen Einfluss auf das Zellwachstum und den Stoffwechsel. BIS-TRIS-Propanpuffer kann zur Vorbereitung von Zellkulturmedien verwendet werden, um während des Zellkulturprozesses einen stabilen pH-Wert aufrechtzuerhalten.

Verschiedene Zelltypen haben unterschiedliche pH-Anforderungen, erfordern jedoch im Allgemeinen ein Wachstum in einer Umgebung nahe dem physiologischen pH-Wert (ca. 7,2–7,4).

BIS-TRIS-Propanpuffer kann die pH-Änderungen des Kulturmediums während der Zellkultur puffern, pH-Schwankungen durch Ansammlung von Stoffwechselprodukten, Gasaustausch und anderen Faktoren verhindern und eine stabile Wachstumsumgebung für Zellen bieten. Dies ist von großer Bedeutung für das normale Wachstum, die Proliferation und die funktionelle Expression von Zellen und trägt dazu bei, die Erfolgsrate der Zellkultur und die Zuverlässigkeit experimenteller Ergebnisse zu verbessern.

Die Nukleinsäureelektrophorese ist eine häufig verwendete Methode zum Nachweis der Länge und Konzentration von Zielnukleinsäuren, einschließlich DNA- und RNA-Elektrophorese. Es eignet sich für Nukleinsäure-Elektrophorese-Experimente und kann die pH-Stabilität des Elektrophoresepuffers aufrechterhalten.

Bei der Nukleinsäureelektrophorese wandern Nukleinsäuremoleküle unter Einwirkung eines elektrischen Feldes entsprechend ihrer Größe und Ladungseigenschaften.

Es kann die Stabilität des pH-Werts der Lösung während der Elektrophorese gewährleisten, indem es Nukleinsäuremolekülen ermöglicht, in der erwarteten Weise zu wandern, wodurch Nukleinsäurefragmente unterschiedlicher Länge genau getrennt und ihre Konzentrationen erfasst werden. Dies ist von großer Bedeutung für Forschungen wie das Klonen von Genen, die Analyse der Genexpression und die Sequenzierung von Nukleinsäuren.

BIS-TRIS kann auch zum Nachweis von Kreatinkinase verwendet werden. Kreatinkinase ist ein wichtiges Enzym, das eine entscheidende Rolle im Muskelenergiestoffwechsel spielt. Die Bestimmung seiner Aktivität ist für die Diagnose von Muskelerkrankungen und die Beurteilung von Sportverletzungen von großer Bedeutung. Im Nachweisexperiment der Kreatinkinase kann die pH-Stabilität des Reaktionssystems aufrechterhalten werden, um sicherzustellen, dass das Enzym unter optimalen pH-Bedingungen katalytische Aktivität zeigt. Durch die präzise Steuerung des pH-Werts können die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der Messung der Kreatinkinase-Aktivität verbessert werden, was eine starke Unterstützung für die klinische Diagnose und Forschung darstellt.

BIS-TRIS spielt auch eine wichtige Rolle in der Erforschung und Anwendung von Hämoglobin. Während des Trennungsprozesses von Hämoglobin können dessen Stabilität und Aktivität aufrechterhalten werden, um eine Denaturierung oder Aggregation aufgrund von pH-Änderungen zu verhindern. Dies ist für die Reinigung und Strukturforschung von Hämoglobin von großer Bedeutung.

BIS-TRIS kann Hämoglobin während des Gefriertrocknungsprozesses wirksam schützen. Gefriertrocknung ist eine häufig verwendete Methode zur Konservierung biologischer Produkte, allerdings können Proteine ​​während des Gefrier- und Trocknungsprozesses beschädigt werden. Es kann während des Gefriertrocknungsprozesses eine stabile Umgebung für Hämoglobin schaffen, die Denaturierung und Inaktivierung von Proteinen reduzieren und die Aktivität und Stabilität von Hämoglobin nach der Gefriertrocknung verbessern.

IEF (isoelektrische Fokussierungselektrophorese) und 2-D-Gelelektrophorese sind gängige Techniken in der Proteomikforschung, die zur Trennung und Analyse komplexer Proteinmischungen eingesetzt werden. BIS-TRIS kann als Kathodenelektrolyt für die IEF/2-D-Gelelektrophorese verwendet werden.

Während des IEF-Prozesses wandern und konzentrieren sich Proteine ​​in einem pH-Gradienten basierend auf ihrem isoelektrischen Punkt. Der BIS-TRIS-Katholyt kann die pH-Stabilität des Elektrophoresepuffers aufrechterhalten und so sicherstellen, dass Proteine ​​während des isoelektrischen Fokussierungsprozesses genau zu ihrem isoelektrischen Punkt wandern können. Bei der 2-D-Gelelektrophorese ist die Verwendung vonBIS-TRIS-Pufferträgt auch dazu bei, den Trenneffekt und die Auflösung von Proteinen zu verbessern und liefert qualitativ hochwertige-Daten für die Proteomikforschung.