Der Kernbestandteil vonIGF 1 LR3 Sprayist IGF-1 LR3 (Long R3 Insulin like Growth Factor-1), ein gentechnisch verändertes Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1)-Analogon. Es kann Muskelschwund umkehren, indem es den Proteinabbau hemmt und die Muskelsynthese fördert, ist jedoch derzeit auf präklinische Studien beschränkt. Tierversuche haben gezeigt, dass IGF-1 LR3 die Muskelfaserstruktur verbessern kann, Versuche am Menschen wurden jedoch noch nicht durchgeführt. Die neurotrophe Wirkung von IGF-1 LR3 kann die axonale Regeneration und das neuronale Überleben fördern, seine Fähigkeit, die Blut-Hirn-Schranke zu durchdringen, bedarf jedoch weiterer Validierung. Es beschleunigt die Wundheilung durch Stimulierung der Fibroblastenproliferation, es ist jedoch Vorsicht geboten, da das Risiko einer Hypoglykämie besteht.
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IGF 1 LR3 COA
Rohstoffe und gentechnische Modifikation
Produktschlüsseltechnologien
Genquelle und Wirtsauswahl
IGF 1 LR3 Spraywird durch genetische Rekombinationstechnologie hergestellt und seine Gensequenz wird auf Basis des humanen Insulin--ähnlichen Wachstumsfaktors-1 (IGF-1) verändert. Der Wirt für die Expression wird normalerweise aus Escherichia coli (z. B. COH-Stämme) oder Säugetierzellen (z. B. CHO-Zellen) ausgewählt, unter denen das E. coli-System aufgrund seiner hohen Effizienz und geringen Kosten bei der Fermentation mit hoher Dichte weit verbreitet ist.
Modifikation der Aminosäuresequenz
R3-Mutation: Die dritte Aminosäure des natürlichen IGF-1 ist Glutaminsäure (Glu), die durch IGF-1 LR3 durch Arginin (Arg) ersetzt wird und den „R3“-Marker bildet. Diese Mutation verringert die Affinität zu Insulin-ähnlichen Wachstumsfaktor-Bindungsproteinen (IGFBPs) erheblich, erhöht ihre freie Konzentration um mehr als das Tausendfache und erhöht ihre biologische Aktivität um das Zwei- bis Dreifache.
N--terminale Erweiterung: Fügen Sie 13 Aminosäurereste am Ende der B-Kette hinzu, um eine Kettenstruktur aus 83 Aminosäuren zu bilden (in einigen Literaturstellen werden 93 Aminosäuren erwähnt, was auf Unterschiede in den Reinigungsprozessen oder Nachweismethoden zurückzuführen sein kann), wodurch ihre Funktion weiter optimiert wird.
Fermentations- und Reinigungsprozess
Fermentationsprozess
Fermentation mit hoher Dichte: Die Expression von Escherichia coli wird durch einen Hitzeschock bei 42 Grad induziert, und der Fermentationstank kann ein Fassungsvermögen von 50 l erreichen. Das Zielprotein macht 30–40 % des gesamten Bakterienproteins aus.
Optimierung des Kulturmediums: Kontrollieren Sie die Ansammlung von Stoffwechselnebenprodukten (z. B. Essigsäure) und verbessern Sie die Produktreinheit durch die Fütterungsansatz-Kultivierungsstrategie.
Reinigungsprozess
Raue und reine Bühne:
Ionenaustauschchromatographie: Nutzung der Ladungsdifferenztrennung von Proteinen, um die Reinheit auf über 90 % zu erhöhen.
Hydrophobe Interaktionschromatographie: Entfernt weitere Verunreinigungen und erreicht eine Reinheit von über 95 %.
Reine Bühne:
Molekulare Ausschlusschromatographie (SEC-HPLC): Trennen Sie Zielproteine von Dimeren oder Oligomeren mit einer Reinheit von mehr als oder gleich 95 % (nachgewiesen durch SDS-PAGE).
Ultrafiltrationskonzentration: Konzentrieren Sie das Protein mithilfe der Tangentialflussfiltrationstechnologie und ersetzen Sie den Puffer durch ein PBS-System (pH 7,4).
Endfiltration: Verwenden Sie zur Sterilisation eine 0,22 μm Filtermembran, um die Sterilität sicherzustellen.
Qualitätskontrolle
Aktivitätsüberprüfung: Die biologische Aktivität wurde durch einen serumfreien Proliferationstest von menschlichen MCF-7-Brustkrebszellen gemessen und der ED50-Wert betrug weniger als oder gleich 1,5 ng/ml.
Reinheitsprüfung: SDS-PAGE und SEC-HPLC kombinierte Detektion, Reinheit größer oder gleich 95 %.
Verunreinigungskontrolle: Endotoxingehalt kleiner oder gleich 10 EU/mg, Wirtsproteinrückstand kleiner oder gleich 0,005 %, exogener DNA-Rückstand kleiner oder gleich 10 ng/mg.
Vorbereitungsprozess und Stabilität
Gefriertrocknungsschutzformel
Unter Verwendung von 8 % Trehalose oder 5 % Mannitol als Gefriertrocknungsschutzmittel in Kombination mit 0,01 % Tween 80 (Lösungsvermittler) wird flüssiges Protein durch Gefriertrocknungstechnologie in weißes Pulver mit einem Feuchtigkeitsgehalt von weniger als 3 % umgewandelt.
Stabilitätsgarantie
Langzeitlagerung
Gefriergetrocknetes Pulver kann 36 Monate lang bei -20 bis -80 Grad gelagert werden. Nach der Rekonstitution kann es 6 Monate lang unter sterilen Bedingungen bei -20 bis -80 Grad und 7 bis 10 Tage lang bei 2 bis 8 Grad gelagert werden.
Transportbedingungen: Blaue Eisbeutel werden für den Transport gekühlt, um sicherzustellen, dass die Temperatur bei 2–8 Grad gehalten wird und wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermieden wird.
Produktionsausrüstung und GMP-Konformität
Kernausrüstung
Fermentationssystem: 50 l vollautomatischer Fermentationstank (ausgestattet mit pH-, gelöstem Sauerstoff- und Temperatur-Online-Überwachungssystem).
Reinigungssystem: AKTA Avant Proteinreiniger (unterstützt die automatisierte chromatographische Trennung).
Aufbereitungsausrüstung: Mini-Sprühtrockner B-290 (Sprühtrockner) oder Gefriertrocknungsmaschine (zur Pulveraufbereitung).
Analysegeräte: HPLC-MS (Bestätigung des Molekulargewichts), dynamischer Lichtstreuungsanalysator (Erkennung der Partikelgrößenverteilung), Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA).
GMP-Konformität
Die Produktionsumgebung entspricht der „Good Manufacturing Practice for Drugs (Revised 2010)“ und kontrolliert streng Indikatoren wie bakterielle Endotoxine und Wirtsproteinrückstände.
Stellen Sie eine vollständige Qualitätsdokumentation bereit, einschließlich COA (Qualitätszertifikat), MSDS (Sicherheitsdatenblatt) und behördliche Unterstützungsdokumente.
IGF 1 LR3 Spray verzerrt den metabolischen Phänotyp und die funktionelle Differenzierung von Gliazellen
IGF 1 LR3 Sprayist ein Präparat, das die Komponente IGF-1 LR3 enthält, einen künstlich modifizierten lang-wirksamen, insulinähnlichen Wachstumsfaktor. Es hat eine höhere Aktivität als natürliches IGF-1, eine längere Halbwertszeit im Körper und bessere wachstumsfördernde Wirkungen, die die Teilung, Migration und Differenzierung der meisten Zellen fördern können. In der Medizin hat IGF-1 LR3 aufgrund seiner einzigartigen biologischen Eigenschaften große Aufmerksamkeit erregt und wurde zur Erforschung des therapeutischen Potenzials verschiedener Krankheiten untersucht.
Gliazellen sind ein wichtiger Bestandteil des Zentralnervensystems, darunter Mikroglia, Astrozyten und andere. Sie spielen eine unverzichtbare Rolle bei der Aufrechterhaltung der normalen Funktion des Nervensystems, unterstützen das neuronale Überleben und sind an Immunreaktionen beteiligt. Der metabolische Phänotyp und der Funktionsstatus von Gliazellen hängen eng mit der Gesundheit des Nervensystems zusammen, und alle Faktoren, die ihren Stoffwechsel und ihre Funktion beeinflussen, können erhebliche Auswirkungen auf das Nervensystem haben.
Stoffwechselphänotyp und Funktion von Gliazellen
Arten und Verteilung von Gliazellen
Zu den Gliazellen im Zentralnervensystem zählen hauptsächlich Mikroglia und Astrozyten. Mikroglia sind Immunzellen im Zentralnervensystem, die weit im Gehirn und Rückenmark verteilt sind. Sie fungieren als „Wächter“ des Nervensystems, überwachen ständig Veränderungen in der Umgebung und spielen eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der Immunhomöostase des Nervensystems. Astrozyten sind die am häufigsten vorkommende Art von Gliazellen im Zentralnervensystem und besitzen verschiedene Formen und Funktionen. Astrozyten bilden durch ihre Prozesse enge Verbindungen mit Neuronen, Blutgefäßen usw., sind an der Bildung der Blut-{5}Hirnschranke beteiligt, versorgen Neuronen mit Nährstoffen, regulieren die Aufnahme und den Stoffwechsel von Neurotransmittern und haben einen wichtigen Einfluss auf die normale Funktion von Neuronen und die Übertragung neuronaler Signale.
Stoffwechselphänotyp normaler Gliazellen
Unter normalen physiologischen Bedingungen weisen Gliazellen spezifische Stoffwechselphänotypen auf. Mikroglia erfüllen im Ruhezustand Immunüberwachungsfunktionen und ihre Stoffwechselaktivität ist relativ gering, da sie zur Energiegewinnung hauptsächlich auf oxidativen Phosphorylierungswegen beruht. Wenn sie durch das Eindringen von Krankheitserregern, Gewebeschäden usw. stimuliert werden, werden Mikroglia aktiviert und ihr metabolischer Phänotyp erfährt erhebliche Veränderungen, indem sie sich in Richtung eines Stoffwechselmodus verlagert, der von der Glykolyse dominiert wird und schnell Energie und bioaktive Moleküle produziert, um äußere Herausforderungen zu bewältigen. Unter normalen Umständen wird die Stoffwechselaktivität von Astrozyten an die Stoffwechselbedürfnisse von Neuronen angepasst. Sie versorgen sich selbst und die Neuronen mit Energie durch aerobe Oxidation durch die Aufnahme von Glukose. Gleichzeitig sind Astrozyten auch am Glutamat-Glutamin-Zyklus beteiligt, indem sie von Neuronen freigesetztes Glutamat in Glutamin umwandeln und es zurück zu Neuronen transportieren, um erneut Glutamat zu synthetisieren. Dieser Prozess ist entscheidend für die Aufrechterhaltung des Neurotransmitter-Gleichgewichts und der normalen neuronalen Funktion.
Funktionen von Gliazellen
Gliazellen erfüllen mehrere wichtige Funktionen im Zentralnervensystem. Als Immunzellen können Mikroglia Krankheitserreger, beschädigte Zellen und abnormale Proteinaggregate erkennen und eliminieren und an der Regulierung neuroinflammatorischer Reaktionen beteiligt sein. Während der neuronalen Entwicklung sind Mikroglia auch an der synaptischen Beschneidung beteiligt und tragen so dazu bei, die normalen Verbindungen neuronaler Schaltkreise zu formen.
Die Funktionen von Astrozyten sind umfangreicher. Sie bieten nicht nur ernährungsphysiologische und strukturelle Unterstützung für Neuronen, sondern sind auch an der Regulierung der Freisetzung und Aufnahme von Neurotransmittern beteiligt und sorgen so für die Aufrechterhaltung der Neurotransmitter-Homöostase. Darüber hinaus regulieren Astrozyten den Blutfluss im Gehirn und sind an der Aufrechterhaltung der Funktion der Blut-{2}Hirnschranke beteiligt, indem sie mit Blutgefäßen interagieren und so das Nervensystem vor schädlichen Substanzen in der Peripherie schützen.
Die Wirkung von IGF-1 LR3 Spray auf den verzerrten Stoffwechselphänotyp von Gliazellen
Veränderungen in Stoffwechselwegen
IGF-1 LR3 im IGF-1 LR3-Spray kann nachgeschaltete Signalwege aktivieren, indem es an IGF-1-Rezeptoren auf der Oberfläche von Gliazellen bindet und dadurch die Stoffwechselwege von Gliazellen beeinflusst. Im Hinblick auf den Energiestoffwechsel kann die Aktivierung des IGF-1-Signalwegs den Übergang von Gliazellen von der oxidativen Phosphorylierung zur Glykolyse fördern. Unter normalen Umständen ist die oxidative Phosphorylierung der wichtigste Weg für Zellen, Energie zu erzeugen, mit hoher Effizienz, aber relativ langsamer Geschwindigkeit; Obwohl die Glykolyse weniger Energie produziert, kann sie in kurzer Zeit schnell Energie liefern.
Wenn IGF-1 LR3 auf Gliazellen einwirkt, kann es die Expression glykolytischer Enzyme hochregulieren und die glykolytische Aktivität steigern, indem es Signalwege wie PI3K/Akt und Ras/MAPK aktiviert. Die Veränderung dieses Stoffwechselwegs kann zu einer „Verzerrung“ des Energieversorgungsmodus der Gliazellen führen, was zu einer abnormalen Regulierung des Energiestoffwechsels bei unterschiedlichen physiologischen oder pathologischen Zuständen führt.
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