Retatrutid(Verknüpfung:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) ist ein chemisch synthetisierter, langwirksamer GLP-1R/GIPR/GCGR-Polypeptidagonist, der für die Behandlung von Typ-2-Diabetes bei Erwachsenen, Gewichtskontrolle und nichtalkoholischer Fettleber/nichtalkoholischer Steatohepatitis vorgesehen ist. Die Indikation dieses Produkts für Typ-2-Diabetes bei Erwachsenen wurde am 29. August 2023 für die klinische Verwendung zugelassen. Darüber hinaus befindet sich der Antrag auf klinische Registrierung der Indikationen für nichtalkoholische Fettleber/nichtalkoholische Steatohepatitis in der abschließenden Prüfungsphase. Weltweit befinden sich acht GLP-1R/GIPR/GCGR-Agonisten in der Entwicklung, von denen Ritas Retatrutide die schnellsten Fortschritte gemacht hat und im Juni dieses Jahres mit der dritten Phase der klinischen Studie begonnen hat. Im selben Monat gab Rita bekannt, dass auf der Jahrestagung der ADA die Forschungsdaten der zweiten Phase zu Retatrutid veröffentlicht wurden, die zeigen, dass Retatrutid (1 mg, 4 mg, 8 mg oder 12 mg) nach 24 Wochen den Hauptendpunkt der Wirksamkeit erreichte Auswertung für adipöse oder übergewichtige Teilnehmer ohne Diabetes mit einem durchschnittlichen Gewichtsverlust von 17,5 %. Unter den sekundären Endpunkten wurde am Ende der 48-wöchigen Behandlung ein durchschnittlicher Gewichtsverlust von 24,2 % erreicht. Wir haben das Peptid auch im Labor auf Basis der veröffentlichten Methode synthetisiert. Die spezifische Synthesemethode wird kurz beschrieben und die spezifischen Schritte können uns per E-Mail zugesandt werden.
Methode 1:
Die detaillierten Schritte zur Synthese von Retarutid mittels Festkörpersynthese im Labor sind wie folgt:
Bereiten Sie die erforderlichen Reagenzien und Instrumente vor: einschließlich Aminosäuren, Dichlormethan, Kaliumcarbonat, ethoxyliertes Kieselgel, Acetonitril, Pyridin, N-Methylmorpholin, Diisopropylethylchloridquelle, Trifluoressigsäure, DIPEA, Boc-geschützte Aminosäuren und andere Reagenzien sowie Magnetrührer , Rotationsverdampfer und andere Instrumente.
(1) Synthese von Boc-geschützten Aminosäuren: Lösen Sie die erforderlichen Aminosäuren in Dichlormethan, geben Sie Kaliumcarbonatpulver hinzu, rühren Sie gleichmäßig um, geben Sie ethoxyliertes Kieselgel hinzu, rühren Sie weiter und geben Sie dann Pyridin und N-Methylmorpholin hinzu, um Boc-geschützte Aminosäuren zu erhalten.
(2) Festphasensynthese: Acetonitril, Diisopropylethylchlorid-Quelle und Trifluoressigsäure mischen, gleichmäßig rühren, vorbereitete Boc-geschützte Aminosäuren hinzufügen und weiter rühren, um das Festphasensyntheseprodukt zu erhalten.
(3) Entschützungsgruppe: Lösen Sie die Festphasensynthese in Dichlormethan, geben Sie Trifluoressigsäure hinzu, rühren Sie gleichmäßig um und geben Sie dann DIPEA hinzu. Rühren Sie weiter, um die entschützte Festphasensynthese zu erhalten.
(4) Reinigung: Lösen Sie die entschützte Festphasensynthese in Wasser, stellen Sie den pH-Wert mit Natriumhydroxidlösung auf etwa 9,0 ein, stellen Sie dann den pH-Wert mit Essigsäure auf etwa 5,{4}} ein und schließlich Das reine Produkt mit Ether ausfällen.
Methode 2:
Die detaillierten Schritte zur Synthese von Retarutid mittels Flüssigphasensynthese im Labor sind wie folgt:
Bereiten Sie die erforderlichen Reagenzien und Instrumente vor: einschließlich Arginin, Glycin, Essigsäureanhydrid, Triethylamin, Kaliumcarbonat, Dichlormethan, Methanol, Pyridin, N-Methylmorpholin, Essigsäureanhydrid, Natriumacetat und andere Reagenzien sowie Instrumente wie Rührer, Scheidetrichter, Vakuumpumpen, Öfen und Chromatographiesäulen.
(1) Arginin und Glycin in einer geeigneten Menge Dichlormethan auflösen, eine entsprechende Menge Essigsäureanhydrid und Triethylamin hinzufügen und unter einem Rührer gleichmäßig rühren.
(2) Übertragen Sie die gelöste Mischung in einen Ofen und erhitzen Sie sie 1 Stunde lang auf 80 °C, um die Aminosäurereste zu acetylieren.
(3) Neutralisieren Sie die reagierte Lösung mit Kaliumcarbonatpulver, um die Essigsäure in der Lösung zu neutralisieren und Natriumacetat zu erzeugen, und extrahieren Sie dann das erzeugte Peptid mit Dichlormethan.
(4) Waschen Sie die extrahierte Peptidlösung mit Methanol und filtern Sie sie mit einer Vakuumpumpe, um das Rohpeptid zu erhalten.
(5) Lösen Sie das Rohpeptid in einer geeigneten Menge Pyridin und N-Methylmorpholin, geben Sie eine geeignete Menge Essigsäureanhydrid und Natriumacetat hinzu und rühren Sie es gleichmäßig unter einem Rührer.
(5) Filtrieren Sie die reagierte Lösung mit einer Vakuumpumpe, waschen Sie den Filterkuchen mit Methanol und filtrieren Sie dann mit einer Vakuumpumpe, um das endgültige Restarutid zu erhalten.
Methode 3:
Die detaillierten Schritte zur Synthese von Retarutid mithilfe chemischer Methoden im Labor sind wie folgt:
Bereiten Sie die erforderlichen Reagenzien und Instrumente vor: einschließlich Arginin, Glycin, Essigsäureanhydrid, Triethylamin, Kaliumcarbonat, Dichlormethan, Methanol, Pyridin, N-Methylmorpholin, Essigsäureanhydrid, Natriumacetat und andere Reagenzien sowie Instrumente wie Rührer, Scheidetrichter, Vakuumpumpen, Öfen und Chromatographiesäulen.
(1) Arginin und Glycin in einer geeigneten Menge Dichlormethan auflösen, eine entsprechende Menge Essigsäureanhydrid und Triethylamin hinzufügen und unter einem Rührer gleichmäßig rühren.
(2) Übertragen Sie die gelöste Mischung in einen Ofen und erhitzen Sie sie 1 Stunde lang auf 80 °C, um die Aminosäurereste zu acetylieren.
(3) Neutralisieren Sie die reagierte Lösung mit Kaliumcarbonatpulver, um die Essigsäure in der Lösung zu neutralisieren und Natriumacetat zu erzeugen, und extrahieren Sie dann das erzeugte Peptid mit Dichlormethan.
(4) Waschen Sie die extrahierte Peptidlösung mit Methanol und filtern Sie sie mit einer Vakuumpumpe, um das Rohpeptid zu erhalten.
(5) Lösen Sie das Rohpeptid in einer geeigneten Menge Pyridin und N-Methylmorpholin, geben Sie eine geeignete Menge Essigsäureanhydrid und Natriumacetat hinzu und rühren Sie es gleichmäßig unter einem Rührer.
(6) Filtrieren Sie die reagierte Lösung mit einer Vakuumpumpe, waschen Sie den Filterkuchen mit Methanol und filtrieren Sie dann mit einer Vakuumpumpe, um das endgültige Restarutid zu erhalten.
Um das Zielmolekül zu erhalten, sind mehrere organische Synthesereaktionen erforderlich. Darüber hinaus werden bei dieser Methode mehrere organische Reagenzien und komplexe Betriebsbedingungen verwendet, sodass die chemische Synthese von Rotarutid im Labor normalerweise nicht für die Produktion im großen Maßstab oder für industrielle Anwendungen geeignet ist. Für die Produktion im großen Maßstab oder für industrielle Anwendungen ist die am häufigsten verwendete Methode die Herstellung von Rotarutid durch Synthesemethoden wie Biosynthese oder Flüssigphasensynthese, die im Labormaßstab relativ klein, relativ einfach in der Durchführung und für die Herstellung kleiner Produktmengen geeignet sind . Das durch diese Methoden gewonnene Retarutid ist in seiner Struktur und biologischen Aktivität dem durch chemische Methoden synthetisierten Retarutid ähnlich oder ähnlich, weist jedoch die Vorteile einer höheren Ausbeute und einer einfacheren Herstellung auf. Gleichzeitig verfügen sie über ein besseres Industrialisierungspotenzial und breitere Anwendungsaussichten.
Methode 4:
Die detaillierten Schritte zur Synthese von Retarutid mithilfe biologischer Methoden im Labor sind wie folgt:
Vorbereitung der erforderlichen Gene und Reagenzien: Erhalten Sie Plasmide, die das Retatrutide-Gen enthalten, aus der Genbibliothek, transformieren Sie die Plasmide mit Empfängerzellen (wie Escherichia coli) und erhalten Sie technische Bakterien, die das Retatrutide-Gen enthalten.
(1) Kultivierung technischer Bakterien: Verwenden Sie unter geeigneten Temperatur-, pH- und Ionenkonzentrationsbedingungen ein Kulturmedium zur Kultivierung technischer Bakterien, damit diese sich in großen Mengen vermehren können.
(2) Extraktion von Retarutid: Die kultivierten technischen Bakterien werden mit einem Brecher zerkleinert und Zellfragmente werden mithilfe von Methoden wie Ultrafiltration und Sedimentation von Retarutid getrennt, um das Rohprodukt zu erhalten.
(3) Reinigung von Retarutid: Das rohe Retarutid wird mithilfe der Chromatographietechnologie gereinigt, um hochreines Retarutid zu erhalten.
Nachweis und Identifizierung von Rotarutid: Verwenden Sie Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, Massenspektrometrie, Kernspinresonanz und andere Techniken, um die Struktur des gereinigten Rotarutids nachzuweisen und zu identifizieren.
Die chemische Reaktionsgleichung für die biologische Synthese von Retarutid im Labor umfasst hauptsächlich die chemischen Reaktionen während des Genexpressionsprozesses, einschließlich zwei Schritte: Transkription und Translation.
Transkription: Doppelsträngige DNA öffnet sich, wobei ein Strang als Matrize für die Synthese von RNA-Strängen verwendet wird, was die Beteiligung von RNA-Polymerase erfordert. Die Reaktionsgleichung lautet wie folgt:
DNA doppelsträngig: DNApol → mRNA+DNApol
Übersetzung: Ribosomen binden an mRNA, um Peptidketten zu synthetisieren, ein Prozess, der die Beteiligung von Aminosäuren und Energie erfordert. Die Reaktionsgleichung lautet wie folgt:
Ribosom+mRNA → Peptidkette+BIP+Pi+H2O
Peptidkette+ATP → Peptidkette+AMP+PPi
Unter diesen steht DNApol für DNA-Polymerase; MRNA steht für Boten-RNA; Ribosomen stellen Ribosomen dar; Peptidketten stellen Polypeptidketten dar; Das BIP steht für Guanosindiphosphat; Pi steht für anorganische Phosphorsäure; H2O steht für Wasser; ATP steht für Adenosintriphosphat; AMP steht für Adenosinmonophosphat; PPi steht für anorganisches Pyrophosphat. Diese Reaktionen erzeugen die für die Synthese von Retarutid erforderlichen Peptidketten, die dann in späteren Phasen verarbeitet und modifiziert werden, um Retarutid zu erhalten.
Bei den oben genannten Methoden handelt es sich um gängige Methoden zur Synthese von Rotarutid im Labor, jede mit unterschiedlichen Vor- und Nachteilen und unterschiedlichem Anwendungsbereich. Das Labor verwendet normalerweise Flüssigphasensynthese- und Festphasensynthesemethoden für die Produktion in kleinem Maßstab für Forschungs- und Versuchszwecke. Die industrielle Produktion hingegen nutzt eine Kombination aus Biosynthese und Flüssig-/Festphasenproduktion für die Produktion in großem Maßstab, um die Marktnachfrage zu decken. Es ist zu beachten, dass diese Methoden eine strenge Optimierung der Bedingungen und Prozesskontrolle erfordern, um die Qualität und Reinheit des Endprodukts sicherzustellen.