Sephadex G75ist eine Art Gelfilterfüller mit guter Leistung. Es wird durch Vernetzung von Dextran und Epichlorhydrin hergestellt. Es handelt sich um ein Perle -Gel -Gel mit einer großen Menge an Hydroxylgruppen, die in Wasser- und Elektrolytlösungen leicht anschwellen zu können. Die maximale Ausschlussgrenze dieser Verbindung beträgt 80000 und der spezifische Schwellungsgrad hängt von der Menge an Trockenharz und Betriebsbedingungen ab. Beispielsweise kann unter bestimmten Bedingungen der Schwellungsgrad des Trockenharzes 519 ml/g betragen. Wenn der operative pH -Bereich 6,210 (5,210 für einige Produkte) beträgt, kann die Verbindung stabil bleiben. Es wird empfohlen, es bei Raumtemperatur, abkühlend und im Temperaturbereich von 430 Grad (oder 425 Grad) zu lagern, um seine Leistung und Stabilität aufrechtzuerhalten. Diese Substanz ist besonders für große Biomoleküle mit einem Molekulargewicht von mehr als 80000 geeignet. Hauptsächlich für die Entsalzung und einen Pufferersatz solcher großer Biomoleküle. Durch einen Stufenbetrieb mit einem - ist es möglich, Schadstoffe schnell zu entsalzen, zu entfernen und Moleküle auf eine neue Pufferlösung zu übertragen. Neben Entsalzung und Pufferersatz ist Sephadex G-75 auch für den Reinigungsprozess großer Biomoleküle geeignet.
 |
 |
Sephadex G75ist ein Dextrangel, das hauptsächlich für die Trennungs- und Reinigungstechnologie in Biochemie und molekularer Biologie verwendet wird. Die Hauptverwendung dieser Substanz ist wie folgt:
Im Entsalzungsprozess kann es effektiv Salze (normalerweise anorganische Salze kleiner Moleküle) aus biologischen molekularen Lösungen entfernen. Der Vorteil dieser Substanz besteht darin, dass sie leicht zu bedienen, schnell zu bedienen und eine wirksame Entsalzung zu erreichen kann, ohne die Aktivität von Biomolekülen zu verändern. Aufgrund seiner hervorragenden chemischen Stabilität und Biokompatibilität eignet es sich außerdem zur Entsalzungsbehandlung verschiedener Biomoleküle, einschließlich Proteinen, Peptiden, Nukleinsäuren usw. In praktischen Anwendungen wird Gelentalation in der Regel mit anderen Reinigungstechnologien wie Ionenaustausch, Affinitätschromatographie usw. kombiniert, um umfassende Reinigung und Trennung von Biomolekullen zu erreichen.
Diese Substanz hat eine Vielzahl von Anwendungen im Pufferersatz, insbesondere in den Bereichen Biochemie und Molekularbiologie. Zum Beispiel ist es im Prozess der Proteinreinigung manchmal erforderlich, Proteine von einem Puffersystem auf ein anderes Puffersystem zu übertragen, das besser für ihre Stabilität und Aktivität geeignet ist. Und diese Substanz kann dieses Ziel effektiv erreichen; Im Prozess der Nukleinsäure -Extraktion ist es auch erforderlich, die Nukleinsäure von der Lösung zu trennen, die Verunreinigungen und Salze enthält, und sie für nachfolgende Operationen in einen neuen Puffer zu übertragen. Es gilt auch für dieses Szenario; Während der Zellkultur ist es manchmal notwendig, das Kulturmedium oder den Puffer zu ersetzen, um das Zellwachstum und die Zellaktivität aufrechtzuerhalten. Es kann verwendet werden, um schädliche Substanzen aus alten Kulturmedien oder Puffern zu entfernen und neue Kulturmedien oder Puffer einzuführen.
Molekulares Sieben
Bei Proteinforschungs- und Herstellungsprozessen ist es normalerweise erforderlich, Zielproteine von komplexen Gemischen zu trennen. Es kann Proteine basierend auf ihrer Größe trennen und damit die Proteinreinigung erreichen. Durch Anpassung der Elutionsbedingungen wie der Ionenstärke und des pH -Werts des Eluenten kann die Trennungseffizienz von Proteinen weiter optimiert werden. Zusätzlich zu Proteinen und Nukleinsäuren kann es auch zur Trennung und Reinigung anderer Biomoleküle wie Polysaccharide, Enzyme, Antikörper usw. verwendet werden. Obwohl diese Substanz nicht direkt als Werkzeug zur Bestimmung des Molekulargewichts verwendet wird, kann sie als Hilfsmittel für die Bestimmung des Molekulargewichts dienen.
Bei der Proteinreinigung müssen normalerweise kleine Moleküleverunreinigungen wie Salze, kleine Moleküle Metaboliten, ungebundene Liganden usw. aus der Proteinlösung entfernen. Diese Substanz kann diese kleinen Molekülverunreinigungen effektiv aus Proteinlösungen entfernen und so die Reinheit von Proteinen verbessern. Sein molekularer Sieb -Effekt ermöglicht es, dass diese kleinen Molekülverunreinigungen wirksam entfernt werden, was zu reineren Nukleinsäuren führt. Enzympräparate enthalten typischerweise kleine Molekülverunreinigungen wie nicht umgesetzte Substrate, Inhibitoren, Metaboliten usw. Diese Verunreinigungen können die Aktivität und Stabilität von Enzymen beeinflussen. Durch die Gelfiltration des Materials können diese kleinen molekularen Verunreinigungen effektiv entfernt und die Reinheit der Enzympräparation verbessert werden. Zusätzlich zu Proteinen und Nukleinsäuren,,
Simulieren Sie die interzelluläre Signaltransduktion
Intercelluläre Signaltransduktion ist der zentrale regulatorische Mechanismus der Lebensaktivitäten, die komplexe Prozesse wie Zellerkennung, Signalumwandlung und physiologische Reaktion umfassen. Traditionelle Forschung stützt sich häufig auf lebende Zellmodelle, aber es gibt Einschränkungen wie komplexe Signalnetzwerke und mehrere Interferenzfaktoren.Sephadex G75ist ein klassisches Dextran -Gel -Filtrationsmedium. Die poröse Struktur und sein molekularer Siebeffekt liefern ein einzigartiges physikalisches Modell zur Simulation der interzellulären Signaltransduktion.
Ein physikalisches Modell zur Simulation der interzellulären Signaltransduktion unter Verwendung von Sephadex G-75
Simulation interzellulärer Gap Junctions
Gap Junction ist ein hydrophiler Kanal, der zwischen benachbarten Zellen durch einen Linker gebildet wird und einen freien Austausch kleiner Moleküle mit einem Molekulargewicht ermöglicht<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Gradientenbildung von Signalmolekülen: Unterschiedliche Konzentrationen von Signalmolekülen (z. B. cAMP, Ca ²+) werden in die Gelsäule geladen. Die Diffusionsrate von kleinen Molekülen in der Gelpore kann durch den molekularen Siebeffekt beobachtet werden, und die Gradientenübertragung chemischer Signale zwischen den Zellen kann simuliert werden.
Synergistische Antwortsimulation: Zwei interagierende Moleküle (wie Liganden und Rezeptor) werden an beiden Enden der Gelsäule geladen, und ihre Bindungskinetik wird durch den Differenzzeitdifferenz der Elution analysiert, um den molekularen Erkennungsprozess in der direkten Kontaktkommunikation zwischen Zellen zu simulieren.
Simulation des molekularen Kontakts auf der Membranoberfläche
Die Kommunikation zwischen Membranoberflächenmolekülen beruht auf den spezifischen Wechselwirkungen von Zellmembranoberflächenproteinen. Sephadex G-75 kann diesen Prozess durch funktionale Modifikation simulieren:
Rezeptorligandenbindungsexperiment: Biotinylierte Rezeptorproteine (wie EGFR) werden auf der Oberfläche von Gelpartikeln fixiert, fluoreszierende markierte Liganden (wie EGF) werden durch das Streptavidin -Biotin -System und die Bindungssignalintensität mit einer Fluoreszenzdetektor -Detektor -Detektor -Detektor -Affinität erfasst.
Wettbewerbsbindungsanalyse: Vorlasten Sie den Rezeptorligandenkomplex in der Gelsäule, fügen Sie kompetitive Inhibitoren unterschiedlicher Konzentrationen (wie Anti -EGFR -Antikörper) hinzu, berechnen Sie die Hemmungskonstante (KI) durch die Elutionspeakverschiebung und simulieren den Interventionseffekt von Arzneimitteln auf Zellsignalwege.
Simulation der chemischen Signalübertragung
Die chemische Signaltransduktion beruht auf der Diffusion chemischer Signalmoleküle (wie Hormone und Zytokine), die durch Zellen durch Körperflüssigkeiten oder extrazelluläre Matrix für Zielzellen sekretiert werden. Sephadex G - 75 kann ein dreidimensionales Diffusionsmodell konstruieren:
Parakrin -Systemsimulation: Sekretorische Zellen (wie Makrophagen) und Zielzellen (z. B. T -Zellen) sind in Gelmikrokugeln eingekapselt, und der Aktivierungsstatus von Zielzellen (z.
Endokrine Signalübertragung: Fluoreszenzmarkierte Hormone (wie Insulin) werden in die Gelsäule geladen, und ihre Wechselwirkung mit Gelporen wird durch die Elutionszeit analysiert, und die halbe - -Lebene von Hormonen im Blutkreislauf und die Verteilung der Zielorganisation wird durch Kombination mathematischer Modelle vorhergesagt.
Anwendungsfall von Sephadex G-75 in der Zellsignalforschung
Erforschung der Signaltransduktion von rotem Blutkörperchen und der Integrinfunktion
Das Thrombozytenadhäsionsrezeptor -Integrin IIB 3 ist das am häufigsten vorkommende Glykoprotein auf der Oberfläche der Thrombozytenmembran und für die Bildung von Hämostase und Thrombus entscheidend. Untersuchen Sie die Verwendung von Sephadex G-75, um die Wechselwirkung zwischen Blutplättchen und Subendothelkollagen zu simulieren:
Integrin -Aktivierungsmodell: Das gereinigte Integrin IIB 3 wurde auf der Oberfläche von Gelpartikeln fixiert, und löslicher Fibrinogen (FG) wurde als Ligand zugegeben. Die Bindungskinetik wurde durch Oberflächenplasmonresonanz (SPR) nachgewiesen. Es wurde festgestellt, dass die Affinität von Integrin zu FG nach der Aktivierung signifikant verbessert war (KD wurde von μm auf NM reduziert).
Thrombozyten -Arzneimittel -Arzneimittel -Screening: Vorlast -Integrin -FG -Komplex in Gelsäule, addieren Sie Thrombozytenaggregationshemmungsmedikamente unterschiedlicher Konzentrationen (z. B. Tirofiban), berechnen Sie die Hemmrate von Arzneimitteln zur Integrinaktivität durch Elutionspeakverschiebung und liefern eine hohe {{}} -durchsatz -Screening -Plattform für die Entwicklung neuer Antithrombotikmedikamente.
Regulation von tumorbezogenen Signalwegen
Tumorzellen fördern die Proliferation und Metastasierung durch abnormale Aktivierung von Signalwegen wie MAPK und PI3K/AKT. Sephadex G-75 kann verwendet werden, um Schlüsselproteine in Signalwegen zu isolieren und zu reinigen:
EGFR-Signalweg-Forschung: EGFR-Protein wurde durch Sephadex G-75-Gelfiltration gereinigt und sein Phosphorylierungsstatus wurde durch Massenspektrometrie analysiert. Es wurde festgestellt, dass der Phosphorylierungsniveau von Y1068- und Y1086 -Stellen von EGFR nach der EGF -Stimulation signifikant erhöht war, die stromabwärts nachgeschaltete ERK1/2- und Akt -Signale aktivierte.
Analyse der Arzneimittelresistenzmechanismus: In Arzneimittel - resistente Magenkrebszellen (SGC7901/VCR) wurde das UHRF1-Protein isoliert und durch Sephadex G-75 gereinigt, und es wurde festgestellt, dass seine Überexpression die Aktivierung von Apoptosen in verwandten Apoptosen inhibitieren kann (wie Caspase-3), die Chemotherapie-Sensotität verringern (wie Caspase-3).
Immunzellensignalisierung und Polysaccharidregulation
Rotalgen -Polysaccharide (BFP) verbessern die Immunantwort, indem die NF - κ B- und MAPK -Signalwege in Makrophagen aktiviert werden. Untersuchungen zur Trennung und Reinigung von BFP und seiner Komponenten (F1, F2, F3) unter Verwendung von Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% wurden durch Sephadex G-75-Gelfiltration in Kombination mit Deae Cellulose 52-Ionenaustauschchromatographie erhalten, und ihre Molekulargewichte betrugen 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa bzw. 45 kDa.
Aktivierung des Signalwegs: Im RAW264.7 -Makrophagenmodell können BFP und seine Komponenten die Sekretion von NO und TNF - signifikant induzieren, und sein Mechanismus umfasst NF {{2} κ B nukleare Translokation und Phosphorylierung von JNK, ERK und P38 MAPK. Die durch Sephadex G -} 75 getrennten gereinigten Komponenten zeigten, dass F1 den stärksten Aktivierungseffekt auf NF - κ B und MAPK -Pfade aufwies (erhöht die Produktion nicht um 2,5 Mal und TNF - Sekretion um dreimal).
Beliebte label: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, Lieferanten, Hersteller, Fabrik, Großhandel, Kaufen, Preis, Masse, zum Verkauf